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DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL (DGP)

El diagnóstico genético preimplantacional (DGP) es el estudio del ADN de embriones humanos para seleccionar los que cumplen determinadas características y/o eliminar los que portan algún tipo de defecto congénito.

Sólo puede llevarse a a cabo en embriones in vitro (en un laboratorio), por lo que este test se realiza siempre conjuntamente con un ciclo de fecundación in vitro (FIV).

Fecundación In Vitro (resumen breve)

Se prescribe medicación para estimular la producción de múltiples óvulos.

* La extracción de los óvulos se realiza por vía transvaginal, utilizando una aguja guiada por ultrasonidos
* Lo óvulos reciben una inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI). Los óvulos fecundados se pasan a una incubadora hasta que el embrión alcanza el estadio de 6 a 10 células..
* En este momento se realiza una biopsia a una o dos células del embrión y se lleva a cabo el DGP.
* Los embriones normales se transfieren al útero de la mujer a los 4 o 5 días de la obtención de los óvulos.

Biopsia Embrionaria

A fin de permitir el análisis de un embrión humano antes de transferirlo al útero materno, se extraen una o dos células del embrión que consta de 6 a 10 células, sin comprometer su viabilidad., de modo que puede analizarse el material genético en estas células. Es importante remarcar que en los análisi genéticos rutinarios se dispone de cientos de células. Sin embargo, en la biopsia embrionaria sólo se dispone de una o dos células y deben contener un núcleo que permita determinar el estatus genético del embrión. La biopsia en sí es un método relativamente sencillo, pero esto no significa que sea un procedimiento fácil de emprender. Los embriones se biopsian en el estadio pe-implantacional, al tercer día de vida. En este punto, el embrión está compuesto por entre 4 y 12 células, que todavía se distinguen bien la una de la otra y es posible extraer una de ellas sin afectar a las células adyacentes. Sin embargo, al cuarto día, como muy tarde, el embrión empieza a compactarse en un proceso por el cual el contorno de las células se vuelve menos claro y toma el aspecto de una pelota compacta.

Extracción de células

En este momento, el embrión todavía está rodeado por una capa de glicoproteína, la zona pelúcida, y para extraer cualquier célula es preciso perforarla. Esto se lleva a cabo bien utilizando un medio de cultivo ácido que “disuelve” localmente la zona pelúcida,   o más convenientemente realizando una brecha con láser, permitiendo la inserción de una micro-pipeta y la extracción de una célula. Normalmente se realiza un agujero de tamaño inferior a la propia célula, lo cual ayuda a mantener la integridad del embrión dentro de su capa protectora durante el desarrollo posterior en el laboratorio de FIV. Durante su manipulación en un microscopio invertido, el embrión se mantiene en un medio de cultivo calefactado que permite la extracción de células con el mínimo de trauma al embrión. No existen referencias de que la extracción de hasta una quarta parte del embrión resulte nociva para su futuro desarrollo. En este estadio de desarrollo,  las células del embrión son pluripotenciales (cada célula es capaz de desarrollarse en un embrión completo) por lo que el embrión puede compensar la pérdida de algunas de ellas.



Biopsia Embrionaria    (ilustración)

Análisis

La célula que se ha extraído (blastómero) se fija a una placa de vidrio, para su análisis cromosómico, o se coloca en un tubo con una solución tampón para el diagnóstico de un gen preciso. Las células se analizan utilizando una técnica llamada  Hibridación in situ fluorescente (FISH) o análisis del ADN. Durante el análisis genético, se incuban los embriones hasta el quinto día de desarrollo, momento en el cual pueden estar, bien en el estado de mórula tardía, bien en el de blástula. Los embriones que, como resultado del análisis, se hallen libres de anormalidades genéticas, se colocan en el interior de la cavidad uterina.

Otros aspectos a tener en cuenta sobre el DGP

Errores de diagnóstico

Existe un determinado índice de error en el diagnóstico debido a mosaicismo en el embrión. Algunos embriones pueden contener blastómeros (células producidas durante la segmentación de un óvulo fertilizado) que son genéticamente normales y, en el mismo embrión, otros blastómeros anormales. Esto se llama mosaicismo. Por este motivo el diagnóstico podría no ser correcto y tener como consecuencia la transferencia de un embrión portador de una anormalidad cromosómica o la incapacidad de transferir un embrión normal.

El error de diagnóstico también puede deberse a técnicas de fijación celular inadecuadas, errores de desnaturalización del ADN, pérdida de alelos o amplificación de ADN contaminado.

Un estudio reciente de la European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE) documentaba los resultados del DGP de 25 consorcios miembros desde 1999 a 2001. Aparecían 8 casos confirmados de error diagnóstico de 451 embriones analizados por DGP; un 1% (3/305) para análisis cromosómico y un 3.4% (5/146) para trastornos genéticos concretos.

¿Existen riesgos asociados al DGP?

Las técnicas de micromanipulación requeridas para realizar la biopsia embrionaria han sido utilizadas desde hace tiempo, por lo que el riesgo de daño accidental al embrión durante la obtención de la(s) célula(s) es inferior al 1%.

No existe riesgo para el embrión con posterioridad al análisis, puesto que las células analizadas no vuelven a implantarse en el embrión. Puede exisitir una ligera posibilidad  de no implantación después de la biopsia embrionaria en comparación con un embrión que no haya sido biopsiado. Con el tiempo, otros riesgos pueden hacerse aparentes, pero quedan superados por los beneficios que el test aporta a cada pareja.

Procedimientos en el laboratorio de fertilización de embriones
¿Quién se ocupa de los óvulos, esperma y embriones en el laboratorio de FIV?

El embriólogo es responsable del cultivo, mantenimiento y protección de los pacientes, óvulos, esperma y embriones. El embriólogo ha recibido formación especializada y cumple los requerimientos para un laboratorio de tecnología reproductiva certificado.

 
 ¿Cuál es la secuencia de acontecimientos en el laboratorio para un ciclo de FIV que incluya PGD?

Cuando una paciente inicia un ciclo de tratamiento, se desarrolla y establece un plan individualizado en el laboratorio de FIV. Los elementos que conforman su plan pueden ser, entre otros, el modo de fertilización, cuántos óvulos se espera obtener o si la paciente deseará congelar los embriones fertilizados sobrantes.

En el día anterior a la extracción de los óvulos, se prepara el medio de cultivo.  Se etiquetan los recipientes que contendrán los óvulos, así como los tubos en los que se procesará el esperma, y se colocan en la incubadora y espacios dedicados, respectivamente. Se prepara una tabla de laboratorio de paciente para confirmar su identidad y la de la muestra de semen utilizada para la preparación de esperma para la fertilización del óvulo, a fín de proporcionar un registro de todos los óvulos y embriones y registrar los nombres de los embriólogos y doctores, así como las técnicas y procedimientos utilizados, confirmar la identidad del paciente en el instante de transferir el embrión y registrar los medios de cultivo utilizados para el ciclo de la paciente a fin de asegurar que se cumplen los requerimientos de control de calidad.

En el momento de la extracción de los óvulos, se confirma la identidad de la paciente y se colocan su óvulos en los recipientes etiquetados a tal efecto. Se acepta la correspondiente muestra de semen después de su identificación en la etiqueta del recipiente y se registra en la tabla de la paciente. Se separan los espermatozoides móviles del resto de la muestra. De acuerdo con el plan de tratamiento y después de confirmar la identidad de ambos, óvulos y espermatozoides, se inyectan los óvulos a las 2-8 horas de su extracción.

Después de un período de 15 a 18 horas, se examinan los ovocitos para determinar si han sido o no fertilizados. La fertilización se confirma cuando se observan dos pronúcleos (uno del espermatozoide y uno del óvulo). En las siguientes 24 horas, se confirma la aparición de división celular. The egg, with the union of genetic complements from each parent, will divide into two cells, and each can divide into two cells. In this way, the embryo expands in cell number and stage of development - the egg has become an embryo. On day 3 after egg retrieval, embryos can be selected for transfer. If there are extra fertilized eggs or embryos, these can be frozen and stored for potential use in a future cycle.

El estudio más largo realizado a niños nacidos de FIV y otros tratamientos relacionados es tranquilizador en términos de inteligencia y salud fisiológica. Tomaron parte en él más de 1500 niños de Gran Bretaña, Bélgica, Suecia, Dinamarca y Grecia.  Fue financiado por la Unión Europea, y realizó un seguimiento hasta los 5 años de edad. Los investigadores evaluaron el desarrollo físico, las relaciones familiares y el desarrollo intelectual psicológico y social.

No existen diferencias con el grupo de control por cuanto respecta a peso y medida al nacer, tampoco en inteligencia, habilidades para el lenguaje, habilidades motoras, ni en conducta o temperamento.


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